LC-901型液相色譜儀根據(jù)固定相是液體或是固體，又分為液-液色譜(LLC）及液-固色譜(LSC）�，F(xiàn)代液相色譜儀由高壓輸液泵、進(jìn)樣系統(tǒng)、溫度控制系統(tǒng)、色譜柱、檢測器、信號記錄系統(tǒng)等部分組成。與經(jīng)典液相柱色譜裝置比較，具有高效、快速、靈敏等特點(diǎn)。

原理

  樣品中呋喃唑酮用二氯甲烷提取，蒸發(fā)濃縮提取液，無水硫酸鈉去除水分，用正己烷液-液萃取除去脂肪及其他雜質(zhì)，離心，取下層清液經(jīng)膜過濾器后用高效液相色譜儀分離，紫外檢測器檢測，外標(biāo)法定量。

試劑和材料

乙腈：色譜純。

二氯甲烷：色譜純。

正己烷：分析純，用乙腈飽和。

 85%磷酸：分析純。

乙腈水溶液：乙腈+水（體積分?jǐn)?shù)為80+20）。

無水硫酸鈉：分析純，經(jīng)640℃灼燒4.0h后，貯于密閉容器中備用。

無水硫酸鈉柱：200 mm×24 mm（id），內(nèi)裝50 mm~100 mm高的無水硫酸鈉。

呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)品：純度≥99.5%。

呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)貯備液：稱取10.0 mg呋喃唑酌，用乙腈水溶液溶解并稀釋定容至50 mL棕色容量瓶中，在冰箱中冷藏保存，保存期1個月。該液1 mL相當(dāng)于200μg呋喃唑酮。

試驗用水：符合GB/T 6682一級水標(biāo)準(zhǔn)。

儀器和設(shè)備

高效液相色譜儀（LC-901型，北京普瑞分析儀器有限公司）， 配有紫外檢測器。

高速組織搗碎機(jī)。

旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀。

離心機(jī)。

振蕩器。

蒸發(fā)燒瓶，具塞。

刻度離心管。

膜孔濾器：0.45μm。

色譜條件

色譜柱：C18柱， 250 mm×4.6mm（id），粒度5μm。

流動相：乙腈+水+磷酸（體積分?jǐn)?shù)為40+60+0.1）。

流速： 0.8 mL/min。

檢測波長：365 nm。

柱溫：室溫。

進(jìn)樣量：20 μL。

樣品測定

試樣制備

  取魚、蝦、蟹、鱉等水產(chǎn)品可食部分，切成不大于5 mm×5 mm×5 mm的小塊后混勻，經(jīng)高速組織搞碎機(jī)搗碎即可，充分混勻。

提取

  稱取搗碎樣品約10g （粘確至0.01 g），加25 mL二氯甲烷攪拌分散后浸泡15min， 在振蕩器上振蕩5 min，提取液經(jīng)無水硫酸鈉柱濾入蒸發(fā)燒瓶中，殘渣分別用25 mL和15 mL二氯甲烷按上述方法各重復(fù)提取一次，再用15 mL二氯甲烷沖洗無水硫酸鈉柱，并用洗耳球吹出柱中液體，濾液均濾入同一蒸發(fā)燒瓶中，濾液于旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上在45℃左右水浴下減壓蒸發(fā)去除溶劑，蒸發(fā)速度控制在每秒一滴。

凈化

  用1.0mL流動相和1.0mL正己烷溶解殘渣并充分洗滌蒸發(fā)燒瓶，將液體移入離心管中，在

4 000 r/min離心5min，用尖嘴吸管移去上層正己烷層，再向離心管中加入1.0mL正己烷�；靹�2min，商心，用尖嘴吸管移去上層正己烷層，下層清液經(jīng)0.45μm膜孔濾器過濾后進(jìn)HPLC分析。

 測定

呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)工作液配制

  臨用前，取呋喃唑酮標(biāo)準(zhǔn)貯備液，用流動相稀釋成濃度為0.01μg/mL~1.00μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液。

液相色譜測定

  根據(jù)樣品液中呋喃唑酮?dú)埩袅壳闆r，選定峰高相近的標(biāo)準(zhǔn)工作溶液。標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣品液中呋哺唑酮響應(yīng)值均應(yīng)在儀器檢測線性范圍內(nèi)。對標(biāo)準(zhǔn)工作溶液和樣品液等體積參插進(jìn)樣進(jìn)行測定。在上述色譜條件下，呋喃唑酮保留時間約為5.8 min。

更新時間：2024/8/12 8:46:22